Gràcies per visitar nature.com. La versió del navegador que esteu utilitzant té compatibilitat limitada amb CSS. Per a una millor experiència, us recomanem que utilitzeu la darrera versió del navegador (o que desactiveu el mode de compatibilitat a l'Internet Explorer). A més, per garantir una compatibilitat continuada, aquest lloc no inclourà estils ni JavaScript.
La melamina és un contaminant alimentari reconegut que pot estar present en certes categories d'aliments tant accidentalment com intencionadament. L'objectiu d'aquest estudi va ser verificar la detecció i quantificació de la melamina en llet artificial i llet en pols. Es van analitzar un total de 40 mostres d'aliments disponibles comercialment, incloent-hi llet artificial i llet en pols, de diferents regions de l'Iran. El contingut aproximat de melamina de les mostres es va determinar mitjançant un sistema de cromatografia líquida d'alta resolució-ultraviolada (HPLC-UV). Es va construir una corba de calibratge (R2 = 0,9925) per a la detecció de melamina en el rang de 0,1–1,2 μg mL−1. Els límits de quantificació i detecció van ser 1 μg mL−1 i 3 μg mL−1, respectivament. Es va analitzar la melamina en llet artificial i llet en pols i els resultats van mostrar que els nivells de melamina en les mostres de llet artificial i llet en pols eren de 0,001–0,095 mg kg−1 i de 0,001–0,004 mg kg−1, respectivament. Aquests valors estan en línia amb la legislació de la UE i el Codex Alimentarius. És important tenir en compte que el consum d'aquests productes lactis amb un contingut reduït de melamina no representa un risc significatiu per a la salut del consumidor. Això també ho corroboren els resultats de l'avaluació de riscos.
La melamina és un compost orgànic amb la fórmula molecular C3H6N6, derivat de la cianamida. Té una solubilitat molt baixa en aigua i conté aproximadament un 66% de nitrogen. La melamina és un compost industrial àmpliament utilitzat amb una àmplia gamma d'usos legítims en la producció de plàstics, fertilitzants i equips de processament d'aliments (inclosos els envasos d'aliments i els estris de cuina)1,2. La melamina també s'utilitza com a portador de fàrmacs per al tractament de malalties. L'alta proporció de nitrogen a la melamina pot conduir a un mal ús del compost i a impartir les propietats de les molècules de proteïnes als ingredients alimentaris3,4. Per tant, afegir melamina als productes alimentaris, inclosos els productes lactis, augmenta el contingut de nitrogen. Així, es va concloure erròniament que el contingut de proteïnes de la llet era més alt del que realment era.
Per cada gram de melamina afegit, el contingut de proteïnes dels aliments augmentarà un 0,4%. Tanmateix, la melamina és altament soluble en aigua i pot causar danys més greus. Afegir 1,3 grams de melamina a productes líquids com la llet pot augmentar el contingut de proteïnes de la llet en un 30%5,6. Tot i que la melamina s'afegeix als aliments animals i fins i tot humans per augmentar el contingut de proteïnes7, la Comissió del Codex Alimentarius (CAC) i les autoritats nacionals no han aprovat la melamina com a additiu alimentari i l'han catalogada com a perillosa si s'ingereix, s'inhala o s'absorbeix a través de la pell. El 2012, l'Agència Internacional per a la Recerca sobre el Càncer de l'Organització Mundial de la Salut (OMS) va catalogar la melamina com a carcinogen de classe 2B perquè pot ser perjudicial per a la salut humana8. L'exposició a llarg termini a la melamina pot causar càncer o danys renals2. La melamina dels aliments pot formar complexos amb l'àcid cianúric per formar cristalls grocs insolubles en aigua que poden causar danys al teixit renal i de la bufeta, així com càncer del tracte urinari i pèrdua de pes9,10. Pot causar una intoxicació alimentària aguda i, en concentracions elevades, la mort, especialment en nadons i nens petits.11 L'Organització Mundial de la Salut (OMS) també ha establert la ingesta diària tolerable (IDT) de melamina per a humans en 0,2 mg/kg de pes corporal al dia segons les directrius de la CAC.12 L'Administració d'Aliments i Medicaments dels Estats Units (FDA dels EUA) ha establert el nivell màxim de residus de melamina en 1 mg/kg en fórmules infantils i 2,5 mg/kg en altres aliments.2,7 El setembre de 2008, es va informar que diversos fabricants nacionals de fórmules infantils havien afegit melamina a la llet en pols per augmentar el contingut proteic dels seus productes, cosa que va provocar una intoxicació per llet en pols i va desencadenar un incident d'intoxicació per melamina a tot el país que va emmalaltir més de 294.000 nens i va hospitalitzar més de 50.000.13
La lactància materna no sempre és possible a causa de diversos factors com les dificultats de la vida urbana, les malalties de la mare o del fill, cosa que porta a l'ús de llet artificial per alimentar els nadons. Com a resultat, s'han establert fàbriques per produir llet artificial que s'assembli el màxim possible a la llet materna en composició14. La llet artificial que es ven al mercat sol estar feta de llet de vaca i normalment està feta amb una barreja especial de greixos, proteïnes, carbohidrats, vitamines, minerals i altres compostos. Per tal que sigui propera a la llet materna, el contingut de proteïnes i greixos de la llet artificial varia i, depenent del tipus de llet, s'enriqueixen amb compostos com vitamines i minerals com el ferro15. Com que els nadons són un grup sensible i hi ha risc d'intoxicació, la seguretat del consum de llet en pols és de vital importància per a la salut. Després del cas d'intoxicació per melamina entre els nadons xinesos, els països de tot el món han prestat molta atenció a aquest tema i la sensibilitat d'aquesta àrea també ha augmentat. Per tant, és especialment important reforçar el control de la producció de llet artificial per protegir la salut dels nadons. Hi ha diversos mètodes per detectar melamina en aliments, com ara la cromatografia líquida d'alta resolució (HPLC), l'electroforesi, el mètode sensorial, l'espectrofotometria i l'assaig immunosorbent lligat a enzims antigen-anticòs16. El 2007, la Food and Drug Administration (FDA) dels EUA va desenvolupar i publicar un mètode HPLC per a la determinació de melamina i àcid cianúric en aliments, que és el mètode més eficaç per determinar el contingut de melamina17.
Les concentracions de melamina en llet artificial per a lactants mesurades mitjançant una nova tècnica d'espectroscòpia d'infrarojos oscil·laven entre 0,33 i 0,96 mil·ligrams per quilogram (mg kg-1). 18 Un estudi a Sri Lanka va trobar que els nivells de melamina en llet sencera en pols oscil·laven entre 0,39 i 0,84 mg kg-1. A més, les mostres de llet artificial importades contenien els nivells més alts de melamina, amb 0,96 i 0,94 mg/kg, respectivament. Aquests nivells estan per sota del límit reglamentari (1 mg/kg), però cal un programa de control per a la seguretat del consumidor. 19
Diversos estudis han examinat els nivells de melamina en fórmules infantils iranianes. Aproximadament el 65% de les mostres contenien melamina, amb una mitjana de 0,73 mg/kg i un màxim de 3,63 mg/kg. Un altre estudi va informar que el nivell de melamina en fórmules infantils oscil·lava entre 0,35 i 3,40 μg/kg, amb una mitjana d'1,38 μg/kg. En general, la presència i el nivell de melamina en fórmules infantils iranianes s'han avaluat en diversos estudis, i algunes mostres contenien melamina que superava el límit màxim establert per les autoritats reguladores (2,5 mg/kg/pinso).
Tenint en compte l'enorme consum directe i indirecte de llet en pols a la indústria alimentària i la importància especial de les fórmules infantils en l'alimentació infantil, aquest estudi tenia com a objectiu validar el mètode de detecció de melamina en llet en pols i fórmules infantils. De fet, el primer objectiu d'aquest estudi va ser desenvolupar un mètode quantitatiu ràpid, senzill i precís per detectar l'adulteració de melamina en fórmules infantils i llet en pols mitjançant cromatografia líquida d'alta resolució (HPLC) i detecció ultraviolada (UV); en segon lloc, l'objectiu d'aquest estudi va ser determinar el contingut de melamina en fórmules infantils i llet en pols venudes al mercat iranià.
Els instruments utilitzats per a l'anàlisi de melamina varien segons el lloc de producció d'aliments. Es va utilitzar un mètode d'anàlisi HPLC-UV sensible i fiable per mesurar els residus de melamina a la llet i les fórmules infantils. Els productes lactis contenen diverses proteïnes i greixos que poden interferir amb la mesura de la melamina. Per tant, tal com van assenyalar Sun et al. 22, cal una estratègia de neteja adequada i eficaç abans de l'anàlisi instrumental. En aquest estudi, vam utilitzar filtres de xeringa d'un sol ús. En aquest estudi, vam utilitzar una columna C18 per separar la melamina a la fórmula infantil i la llet en pols. La figura 1 mostra el cromatograma per a la detecció de melamina. A més, la recuperació de les mostres que contenien 0,1–1,2 mg/kg de melamina va oscil·lar entre el 95% i el 109%, l'equació de regressió va ser y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925) i els valors de la desviació estàndard relativa (RSD) van oscil·lar entre el 0,8 i el 2%. Les dades disponibles indiquen que el mètode és fiable en el rang de concentració estudiat (Taula 1). El límit instrumental de detecció (LOD) i el límit de quantificació (LOQ) de la melamina van ser d'1 μg mL−1 i 3 μg mL−1, respectivament. A més, l'espectre UV de la melamina va mostrar una banda d'absorció a 242 nm. El mètode de detecció és sensible, fiable i precís. Aquest mètode es pot utilitzar per a la determinació rutinària del nivell de melamina.
Diversos autors han publicat resultats similars. Es va desenvolupar un mètode de cromatografia líquida d'alta resolució amb matriu de fotodíodes (HPLC) per a l'anàlisi de melamina en productes lactis. Els límits inferiors de quantificació van ser 340 μg kg−1 per a la llet en pols i 280 μg kg−1 per a la llet artificial a 240 nm. Filazzi et al. (2012) van informar que no es va detectar melamina en la llet artificial mitjançant HPLC. Tanmateix, el 8% de les mostres de llet en pols contenien melamina a un nivell de 0,505–0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.23 van dur a terme un estudi similar i van determinar que el contingut de melamina de la llet artificial (número de mostra: 72) mitjançant cromatografia líquida d'alta resolució amb espectrometria de masses/MS (HPLC-MS/MS) era aproximadament de 0,0431–0,346 mg kg−1. En un estudi realitzat per Venkatasamy et al. (2010), es va utilitzar un enfocament de química verda (sense acetonitril) i cromatografia líquida d'alta resolució en fase inversa (RP-HPLC) per estimar la melamina en fórmules infantils i llet. El rang de concentració de la mostra va ser d'1,0 a 80 g/mL i la resposta va ser lineal (r > 0,999). El mètode va mostrar recuperacions de 97,2–101,2 en el rang de concentració de 5–40 g/mL i la reproductibilitat va ser inferior a l'1,0% de desviació estàndard relativa. A més, el LOD i el LOQ observats van ser de 0,1 g mL−1 i 0,2 g mL−124, respectivament. Lutter et al. (2011) van determinar la contaminació per melamina en llet de vaca i fórmules infantils a base de llet mitjançant HPLC-UV. Les concentracions de melamina van oscil·lar entre < 0,2 i 2,52 mg kg−1. El rang dinàmic lineal del mètode HPLC-UV va ser de 0,05 a 2,5 mg kg−1 per a la llet de vaca, de 0,13 a 6,25 mg kg−1 per a les fórmules infantils amb una fracció màssica de proteïna <15% i de 0,25 a 12,5 mg kg−1 per a les fórmules infantils amb una fracció màssica de proteïna del 15%. Els resultats del LOD (i del LOQ) van ser de 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) per a la llet de vaca, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) per a les fórmules infantils amb <15% de proteïna i 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) per a les fórmules infantils amb un 15% de proteïna, amb una relació senyal-soroll de 3 i 1025 per al LOD i el LOQ, respectivament. Diebes et al. (2012) van investigar els nivells de melamina en mostres de fórmules infantils i llet en pols mitjançant HPLC/DMD. En les fórmules infantils, els nivells més baixos i més alts van ser de 9,49 mg kg−1 i 258 mg kg−1, respectivament. El límit de detecció (LOD) va ser de 0,05 mg kg−1.
Javaid et al. van informar que els residus de melamina en les fórmules infantils es trobaven en el rang de 0,002–2 mg kg−1 mitjançant espectroscòpia d'infrarojos per transformada de Fourier (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai et al.27 van proposar un mètode HPLC-DDA (λ = 220 nm) per estimar la melamina i van aconseguir un LOQ de 0,08 μg mL−1 per a la llet en pols, que era inferior al nivell obtingut en aquest estudi. Sun et al. van desenvolupar un RP-HPLC-DAD per a la detecció de melamina en llet líquida mitjançant extracció en fase sòlida (SPE). Van obtenir un LOD i un LOQ de 18 i 60 μg kg−128, respectivament, que és més sensible que l'estudi actual. Montesano et al. va confirmar l'eficàcia del mètode HPLC-DMD per a l'avaluació del contingut de melamina en suplements proteics amb un límit de quantificació de 0,05–3 mg/kg, que va ser menys sensible que el mètode utilitzat en aquest estudi29.
Sens dubte, els laboratoris analítics tenen un paper important en la protecció del medi ambient mitjançant el control dels contaminants en diverses mostres. Tanmateix, l'ús d'un gran nombre de reactius i dissolvents durant l'anàlisi pot provocar la formació de residus perillosos. Per tant, la química analítica verda (GAC) es va desenvolupar l'any 2000 per reduir o eliminar els efectes adversos dels procediments analítics sobre els operadors i el medi ambient26. Els mètodes tradicionals de detecció de melamina, com ara la cromatografia, l'electroforesi, l'electroforesi capil·lar i l'assaig immunosorbent lligat a enzims (ELISA), s'han utilitzat per identificar la melamina. Tanmateix, entre els nombrosos mètodes de detecció, els sensors electroquímics han atret molta atenció per la seva excel·lent sensibilitat, selectivitat, temps d'anàlisi ràpid i característiques fàcils d'utilitzar30,31. La nanotecnologia verda utilitza vies biològiques per sintetitzar nanomaterials, cosa que pot reduir la generació de residus perillosos i el consum d'energia, promovent així la implementació de pràctiques sostenibles. Els nanocompostos, per exemple, fets de materials respectuosos amb el medi ambient, es poden utilitzar en biosensors per detectar substàncies com la melamina32,33,34.
L'estudi demostra que la microextracció en fase sòlida (SPME) s'utilitza de manera eficaç a causa de la seva major eficiència energètica i sostenibilitat en comparació amb els mètodes d'extracció tradicionals. El respecte al medi ambient i l'eficiència energètica de l'SPME el converteixen en una excel·lent alternativa als mètodes d'extracció tradicionals en química analítica i proporcionen un mètode més sostenible i eficient per a la preparació de mostres35.
El 2013, Wu et al. van desenvolupar un biosensor de ressonància plasmònica superficial (mini-SPR) altament sensible i selectiu que utilitza l'acoblament entre anticossos de melamina i antimelamina per detectar ràpidament la melamina en fórmules infantils mitjançant un immunoassaig. El biosensor SPR combinat amb un immunoassaig (que utilitza albúmina sèrica bovina conjugada amb melamina) és una tecnologia fàcil d'utilitzar i de baix cost amb un límit de detecció de només 0,02 μg mL-136.
Nasiri i Abbasian van utilitzar un sensor portàtil d'alt potencial en combinació amb compostos d'òxid de grafè-quitosà (GOCS) per detectar melamina en mostres comercials37. Aquest mètode va mostrar una selectivitat, precisió i resposta ultra altes. El sensor GOCS va demostrar una sensibilitat notable (239,1 μM−1), un rang lineal de 0,01 a 200 μM, una constant d'afinitat d'1,73 × 104 i un LOD de fins a 10 nM. A més, un estudi realitzat per Chandrasekhar et al. el 2024 va adoptar un enfocament respectuós amb el medi ambient i rendible. Van utilitzar extracte de pell de papaia com a agent reductor per sintetitzar nanopartícules d'òxid de zinc (ZnO-NP) en un mètode respectuós amb el medi ambient. Posteriorment, es va desenvolupar una tècnica única d'espectroscòpia micro-Raman per a la determinació de melamina en fórmules infantils. Les ZnO-NP derivades de residus agrícoles han demostrat potencial com a valuosa eina de diagnòstic i com a tecnologia fiable i de baix cost per al seguiment i la detecció de melamina38.
Alizadeh et al. (2024) van utilitzar una plataforma de fluorescència d'estructura metall-orgànica (MOF) altament sensible per determinar la melamina en llet en pols. El rang lineal i el límit inferior de detecció del sensor, determinats mitjançant 3σ/S, van ser de 40 a 396,45 nM (equivalent a 25 μg kg−1 a 0,25 mg kg−1) i 40 nM (equivalent a 25 μg kg−1), respectivament. Aquest rang està molt per sota dels nivells màxims de residus (LMR) establerts per a la identificació de melamina en fórmules infantils (1 mg kg−1) i altres mostres d'aliments/pinsos (2,5 mg kg−1). El sensor fluorescent (terbi (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) va demostrar una major precisió i una capacitat de mesura més precisa que l'HPLC39 en la detecció de melamina en llet en pols. Els biosensors i nanocompostos en química verda no només milloren les capacitats de detecció, sinó que també minimitzen els riscos ambientals d'acord amb els principis del desenvolupament sostenible.
Els principis de la química verda s'han aplicat a diversos mètodes per a la determinació de melamina. Un enfocament és el desenvolupament d'un mètode de microextracció en fase sòlida dispersiva verda utilitzant el polímer polar natural β-ciclodextrina reticulada amb àcid cítric per a l'extracció eficient de melamina 40 de mostres com ara llet artificial i aigua calenta. Un altre mètode utilitza la reacció de Mannich per a la determinació de melamina en mostres de llet. Aquest mètode és econòmic, respectuós amb el medi ambient i altament precís amb un rang lineal de 0,1-2,5 ppm i un límit de detecció baix 41. A més, es va desenvolupar un mètode rendible i respectuós amb el medi ambient per a la determinació quantitativa de melamina en llet líquida i llet artificial mitjançant espectroscòpia de transmissió infraroja per transformada de Fourier amb alta precisió i límits de detecció d'1 ppm i 3,5 ppm, respectivament 42. Aquests mètodes demostren l'aplicació dels principis de la química verda al desenvolupament de mètodes eficients i sostenibles per a la determinació de melamina.
Diversos estudis han proposat mètodes innovadors per a la detecció de melamina, com ara l'ús d'extracció en fase sòlida i cromatografia líquida d'alta resolució (HPLC)43, així com la cromatografia líquida d'alta resolució (HPLC) ràpida, que no requereix un pretractament complex ni reactius de parells iònics, reduint així la quantitat de residus químics44. Aquests mètodes no només proporcionen resultats precisos per a la determinació de melamina en productes lactis, sinó que també compleixen amb els principis de la química verda, minimitzant l'ús de productes químics perillosos i reduint l'impacte ambiental general del procés analític.
Es van analitzar per triplicat quaranta mostres de diferents marques, i els resultats es presenten a la Taula 2. Els nivells de melamina a les mostres de llet artificial i llet en pols van oscil·lar entre 0,001 i 0,004 mg/kg i entre 0,001 i 0,095 mg/kg, respectivament. No es van observar canvis significatius entre els tres grups d'edat de les llets artificials. A més, es va detectar melamina en el 80% de la llet en pols, però el 65% de les fórmules artificials estaven contaminades amb melamina.
El contingut de melamina en la llet en pols industrial era més alt que en la llet artificial per a lactants, i la diferència era significativa (p < 0,05) (Figura 2).
Els resultats obtinguts van estar per sota dels límits establerts per la FDA (per sota d'1 i 2,5 mg/kg). A més, els resultats estan en línia amb els límits establerts per la CAC (2010) i la EU45,46, és a dir, el límit màxim permès és d'1 mg kg-1 per a les fórmules infantils i de 2,5 mg kg-1 per als productes lactis.
Segons un estudi del 2023 de Ghanati et al.47, el contingut de melamina en diferents tipus de llet envasada a l'Iran oscil·lava entre 50,7 i 790 μg kg−1. Els seus resultats estaven per sota del límit permès per la FDA. Els nostres resultats són inferiors als de Shoder et al.48 i Rima et al.49. Shoder et al. (2010) van trobar que els nivells de melamina en la llet en pols (n=49) determinats per ELISA oscil·laven entre 0,5 i 5,5 mg/kg. Rima et al. van analitzar els residus de melamina en la llet en pols mitjançant espectrofotometria de fluorescència i van trobar que el contingut de melamina en la llet en pols era de 0,72 a 5,76 mg/kg. El 2011 es va dur a terme un estudi al Canadà per controlar els nivells de melamina en les fórmules infantils (n=94) mitjançant cromatografia líquida (LC/MS). Es va trobar que les concentracions de melamina estaven per sota del límit acceptable (estàndard preliminar: 0,5 mg kg−1). És poc probable que els nivells fraudulents de melamina detectats fossin una tàctica utilitzada per augmentar el contingut de proteïnes. Tanmateix, no es pot explicar per l'ús de fertilitzants, la reubicació del contingut dels envasos o factors similars. A més, no es va revelar l'origen de la melamina en la llet en pols importada al Canadà.
Hassani et al. van mesurar el contingut de melamina en llet en pols i llet líquida al mercat iranià el 2013 i van trobar resultats similars. Els resultats van mostrar que, excepte una marca de llet en pols i llet líquida, totes les altres mostres estaven contaminades amb melamina, amb nivells que oscil·laven entre 1,50 i 30,32 μg g−1 en llet en pols i entre 0,11 i 1,48 μg ml−1 en llet. Cal destacar que no es va detectar àcid cianúric en cap de les mostres, cosa que redueix la possibilitat d'intoxicació per melamina per als consumidors.51 Estudis anteriors han avaluat la concentració de melamina en productes de xocolata que contenen llet en pols. Al voltant del 94% de les mostres importades i el 77% de les mostres iranianes contenien melamina. Els nivells de melamina en mostres importades oscil·laven entre 0,032 i 2,692 mg/kg, mentre que els de mostres iranianes oscil·laven entre 0,013 i 2.600 mg/kg. En general, es va detectar melamina en el 85% de les mostres, però només una marca específica tenia nivells superiors al límit permès.44 Tittlemier et al. van informar de nivells de melamina en llet en pols que oscil·laven entre 0,00528 i 0,0122 mg/kg.
La taula 3 resumeix els resultats de l'avaluació de riscos per als tres grups d'edat. El risc va ser inferior a 1 en tots els grups d'edat. Per tant, no hi ha cap risc per a la salut no cancerígen derivat de la melamina en les fórmules infantils.
Els nivells més baixos de contaminació en els productes lactis poden ser deguts a una contaminació no intencionada durant la preparació, mentre que els nivells més alts poden ser deguts a addicions intencionades. A més, el risc general per a la salut humana derivat del consum de productes lactis amb nivells baixos de melamina es considera baix. Es pot concloure que el consum de productes que contenen nivells tan baixos de melamina no representa cap risc per a la salut del consumidor52.
Tenint en compte la importància de la gestió de la seguretat alimentària en la indústria làctia, especialment pel que fa a la protecció de la salut pública, és de suma importància desenvolupar i validar un mètode per avaluar i comparar els nivells i residus de melamina en la llet en pols i les fórmules infantils. Es va desenvolupar un mètode espectrofotomètric HPLC-UV senzill i precís per a la determinació de melamina en fórmules infantils i llet en pols. El mètode es va validar per garantir la seva fiabilitat i precisió. Es va demostrar que els límits de detecció i quantificació del mètode eren prou sensibles per mesurar els nivells de melamina en fórmules infantils i llet en pols. Segons les nostres dades, es va detectar melamina a la majoria de les mostres iranianes. Tots els nivells de melamina detectats estaven per sota dels límits màxims permesos establerts per la CAC, cosa que indica que el consum d'aquests tipus de productes lactis no representa un risc per a la salut humana.
Tots els reactius químics utilitzats eren de grau analític: melamina (2,4,6-triamino-1,3,5-triazina) 99% pura (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); acetonitril de grau HPLC (Merck, Darmstadt, Alemanya); aigua ultrapura (Millipore, Morfheim, França). Filtres de xeringa d'un sol ús (Chromafil Xtra PVDF-45/25, mida de porus 0,45 μm, diàmetre de membrana 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Alemanya).
Per preparar les mostres es van utilitzar un bany d'ultrasons (Elma, Alemanya), una centrífuga (Beckman Coulter, Krefeld, Alemanya) i HPLC (KNAUER, Alemanya).
Es va utilitzar un cromatògraf de líquids d'alt rendiment (KNAUER, Alemanya) equipat amb un detector UV. Les condicions d'anàlisi HPLC van ser les següents: es va utilitzar un sistema UHPLC Ultimate equipat amb una columna analítica ODS-3 C18 (4,6 mm × 250 mm, mida de partícula 5 μm) (MZ, Alemanya). L'eluent HPLC (fase mòbil) va ser una barreja TFA/metanol (450:50 mL) amb un cabal d'1 mL min-1. La longitud d'ona de detecció va ser de 242 nm. El volum d'injecció va ser de 100 μL i la temperatura de la columna va ser de 20 °C. Com que el temps de retenció del fàrmac és llarg (15 minuts), la següent injecció s'ha de fer després de 25 minuts. La melamina es va identificar comparant el temps de retenció i el pic de l'espectre UV dels estàndards de melamina.
Es va preparar una solució estàndard de melamina (10 μg/mL) amb aigua i es va emmagatzemar a la nevera (4 °C) protegida de la llum. Es va diluir la solució madre amb la fase mòbil i es van preparar solucions estàndard de treball. Cada solució estàndard es va injectar a l'HPLC 7 vegades. L'equació de calibratge 10 es va calcular mitjançant una anàlisi de regressió de l'àrea del pic determinada i la concentració determinada.
Es van comprar llet en pols de vaca disponible comercialment (20 mostres) i mostres de diferents marques de llet de fórmula infantil a base de llet de vaca (20 mostres) en supermercats i farmàcies locals a l'Iran per alimentar nadons de diferents grups d'edat (0-6 mesos, 6-12 mesos i >12 mesos) i es van emmagatzemar a temperatura refrigerada (4 °C) fins a l'anàlisi. A continuació, es va pesar 1 ± 0,01 g de llet en pols homogeneïtzada i es va barrejar amb acetonitril:aigua (50:50, v/v; 5 mL). La barreja es va agitar durant 1 minut, després es va sonicar en un bany d'ultrasons durant 30 min i finalment es va agitar durant 1 minut. A continuació, la barreja es va centrifugar a 9000 × g durant 10 min a temperatura ambient i el sobrenedant es va filtrar en un vial d'automostrejador de 2 ml utilitzant un filtre de xeringa de 0,45 μm. El filtrat (250 μl) es va barrejar amb aigua (750 μl) i es va injectar al sistema HPLC10,42.
Per validar el mètode, vam determinar la recuperació, la precisió, el límit de detecció (LOD), el límit de quantificació (LOQ) i la precisió en condicions òptimes. El LOD es va definir com el contingut de la mostra amb una alçada de pic tres vegades el nivell de soroll de referència. D'altra banda, el contingut de la mostra amb una alçada de pic 10 vegades la relació senyal-soroll es va definir com a LOQ.
La resposta del dispositiu es va determinar mitjançant una corba de calibratge que consta de set punts de dades. Es van utilitzar diferents continguts de melamina (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 i 1,2). Es va determinar la linealitat del procediment de càlcul de la melamina. A més, es van afegir diversos nivells diferents de melamina a les mostres en blanc. La corba de calibratge es va construir injectant contínuament de 0,1 a 1,2 μg mL−1 d'una solució estàndard de melamina en mostres de llet artificial i llet en pols, i la seva R2 = 0,9925. La precisió es va avaluar mitjançant la repetibilitat i la reproductibilitat del procediment i es va aconseguir injectant mostres el primer dia i els tres dies següents (per triplicat). La repetibilitat del mètode es va avaluar calculant el percentatge de RSD per a tres concentracions diferents de melamina afegida. Es van realitzar estudis de recuperació per determinar la precisió. El grau de recuperació pel mètode d'extracció es va calcular a tres nivells de concentració de melamina (0,1, 1,2, 2) en mostres de llet artificial i llet en pols9,11,15.
La ingesta diària estimada (IDE) es va determinar mitjançant la fórmula següent: IDE = Ci × Cc/PC.
On Ci és el contingut mitjà de melamina, Cc és el consum de llet i BW és el pes mitjà dels nens.
L'anàlisi de dades es va dur a terme amb el programa SPSS 24. La normalitat es va comprovar amb la prova de Kolmogorov-Smirnov; totes les dades eren proves no paramètriques (p = 0). Per tant, es van utilitzar les proves de Kruskal-Wallis i Mann-Whitney per determinar diferències significatives entre els grups.
Ingelfinger, Jr. La melamina i el seu impacte en la contaminació alimentària global. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, et al. Efecte del pH sobre la migració de melamina en els bols infantils. International Journal of Food Contamination, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP i Gilbert, IH Dirigint compostos tòxics a l'interior dels tripanosomes. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, et al. Avaluació in vitro i in vivo de dendrímers de melamina com a vehicles d'administració de fàrmacs. International Journal of Pharmacy, 281(1–2), 129–132(2004).
Organització Mundial de la Salut. Reunions d'experts 1–4 per revisar els aspectes toxicològics de la melamina i l'àcid cianúric (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH i Lee, PK-T. Toxicitat de la melamina i el ronyó. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. i Demir, N. Desenvolupament d'un nou adsorbent IMAC per a la identificació de melamina en productes lactis mitjançant cromatografia líquida d'alta resolució (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. i Imim, A. Determinació espectrofotomètrica simple de melamina en llet líquida basada en la reacció del verd de Mannich. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. i El-Habib, R. Determinació de melamina en llet artificial, llet en pols i mostres de pangasius mitjançant cromatografia de matriu de díodes/HPLC. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD i Osterloh, JD Toxicitat de la melamina. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
Organització Mundial de la Salut (OMS), Toxicologia i aspectes sanitaris de la melamina i l'àcid cianúric: Informe d'una reunió d'experts col·laborativa OMS/FAO amb el suport de Health Canada, Ottawa, Canadà, 1-4 de desembre de 2008 (2009).
Korma, SA, et al. Estudi comparatiu de la composició lipídica i la qualitat de la llet artificial en pols que conté nous lípids estructurals funcionals i la llet artificial comercial. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. i Hashem, H. Millora del valor nutricional, els atributs de qualitat i la vida útil de la llet artificial per a lactants mitjançant oli de palma. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W., et al. Producció d'anticossos monoclonals contra la melamina i desenvolupament d'un mètode ELISA competitiu indirecte per a la detecció de melamina en llet crua, llet en pols i pinsos. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).